Hei ada! Saya pembekal FMOC - nya - AIB - OH TFA, dan hari ini saya ingin bercakap tentang cara mengoptimumkan saiz - kromatografi pengecualian untuk pemurnian kompaun ini. Saiz - kromatografi pengecualian, juga dikenali sebagai gel - kromatografi penapisan, adalah teknik yang digunakan secara meluas dalam pemurnian peptida seperti FMOC - nya - AIB - OH TFA. Ia memisahkan molekul berdasarkan saiz mereka, yang sangat berguna apabila anda cuba mendapatkan produk yang tulen.
Pertama, mari kita faham asas -asas saiz - kromatografi pengecualian. Fasa pegun dalam kromatografi ini terdiri daripada manik berliang. Molekul yang lebih kecil boleh memasuki liang -liang ini, sementara yang lebih besar tidak boleh. Akibatnya, molekul yang lebih besar melewati lajur lebih cepat, dan yang lebih kecil mengambil masa yang lebih lama untuk elute. Perbezaan masa elusi ini membolehkan kita memisahkan molekul berukuran yang berbeza.
Ketika datang untuk membersihkan FMOC - nya - AIB - OH TFA, terdapat beberapa faktor yang perlu kita pertimbangkan untuk mengoptimumkan proses tersebut.
1. Pemilihan lajur
Pilihan lajur adalah penting. Anda mesti memilih lajur dengan saiz liang yang betul. Sekiranya liang -liang terlalu besar, fmoc - nya - AIB - oh molekul TFA mungkin memasuki mereka, yang akan melambatkan elusi mereka dan mempengaruhi kecekapan pemisahan. Sebaliknya, jika liangnya terlalu kecil, sebatian mungkin tidak dapat berinteraksi dengan betul dengan fasa pegun, dan anda tidak akan mendapat pemisahan yang baik.
Terdapat pelbagai jenis lajur yang tersedia, seperti yang diperbuat daripada dextran, agarose, atau polyacrylamide yang dikaitkan. Setiap mempunyai ciri -ciri sendiri. Sebagai contoh, lajur berasaskan dextran sangat bagus untuk memisahkan molekul bersaiz kecil hingga sederhana. Mereka mempunyai pelbagai pemisahan yang agak sempit, yang boleh memberi manfaat apabila anda berurusan dengan sebatian tertentu seperti FMOC - His - AIB - OH TFA.
2. Fasa mudah alih
Fasa mudah alih adalah cecair yang membawa sampel melalui lajur. Anda perlu memilih fasa mudah alih yang serasi dengan kedua -dua sampel dan fasa pegun. Untuk FMOC - nya - AIB - OH TFA, pilihan biasa adalah penampan berair. PH penampan adalah penting. Sekiranya pH terlalu tinggi atau terlalu rendah, ia boleh menjejaskan caj fmoc - nya - aib - OH TFA molekul, yang mungkin mengubah interaksi mereka dengan fasa pegun.
Anda juga perlu mempertimbangkan kekuatan ionik penampan. Penampan dengan kekuatan ionik yang betul dapat membantu mencegah interaksi khusus antara sampel dan lajur. Sebagai contoh, menambah sedikit garam ke penampan boleh mengurangkan interaksi elektrostatik. Tetapi berhati -hati untuk tidak menambah terlalu banyak garam, kerana ia juga boleh menjejaskan pemisahan.
3. Sampel memuatkan
Berapa banyak sampel yang anda muatkan ke lajur banyak perkara. Sekiranya anda memuatkan terlalu banyak, lajur mungkin mendapat terlalu banyak. Ini boleh membawa kepada pemisahan yang lemah, kerana molekul tidak akan mempunyai cukup masa untuk berinteraksi dengan betul dengan fasa pegun. Sebaliknya, jika anda memuatkan terlalu sedikit, anda mungkin tidak mendapat cukup produk yang disucikan.
Peraturan yang baik adalah bermula dengan sedikit sampel dan secara beransur -ansur meningkatkan beban sambil memantau kualiti pemisahan. Anda juga boleh menggunakan lajur pra untuk mengeluarkan mana -mana zarah besar atau agregat dalam sampel sebelum memasuki lajur utama. Ini dapat membantu melindungi lajur utama dan meningkatkan pemisahan.
4. Kadar aliran
Kadar aliran adalah kelajuan di mana fasa mudah alih bergerak melalui lajur. Jika kadar aliran terlalu cepat, molekul tidak akan mempunyai masa yang cukup untuk berinteraksi dengan fasa pegun, dan pemisahan akan menjadi miskin. Sekiranya kadar aliran terlalu perlahan, ia akan mengambil masa yang lama untuk membuang sampel, dan ia juga mungkin menyebabkan peluasan band.
Anda perlu mencari kadar aliran optimum untuk lajur dan sampel khusus anda. Biasanya, adalah idea yang baik untuk bermula dengan kadar aliran yang agak rendah dan kemudian menyesuaikannya berdasarkan hasil pemisahan. Anda juga boleh menggunakan pengawal aliran untuk mengekalkan kadar aliran malar sepanjang eksperimen.
5. suhu
Suhu juga boleh menjejaskan pemisahan dalam saiz - kromatografi pengecualian. Secara umum, suhu yang lebih tinggi dapat meningkatkan kadar penyebaran molekul, yang dapat meningkatkan pemisahan. Walau bagaimanapun, anda perlu berhati -hati untuk tidak memanaskan sampel terlalu banyak, kerana ia mungkin menyebabkan FMOC - nya - AIB - OH TFA untuk merendahkan.
Kebanyakan masa, suhu bilik adalah titik permulaan yang baik. Tetapi jika anda mendapati bahawa pemisahan itu tidak cukup baik, anda boleh cuba sedikit meningkatkan suhu dan melihat jika ia membuat perbezaan.
Sekarang, mari kita bincangkan beberapa sebatian yang berkaitan. Sekiranya anda berminat dengan perantaraan peptida yang lain, kami juga membekalkanBOC - HIS (TRT) - AIB - OH,FMC - L - LYS - (OTB) - Glu - (OTB - (OTB) - Ya - OEE - OE, danFMOC - GLY - ARG (PBF) - OH. Sebatian ini digunakan dalam sintesis pelbagai peptida dan boleh disucikan menggunakan teknik kromatografi yang sama.
Kesimpulannya, mengoptimumkan saiz - kromatografi pengecualian untuk pemurnian FMOC - His - AIB - OH TFA memerlukan pertimbangan yang teliti terhadap beberapa faktor, termasuk pemilihan lajur, fasa mudah alih, pemuatan sampel, kadar aliran, dan suhu. Dengan baik - menala parameter ini, anda boleh mencapai pemisahan berkualiti tinggi dan mendapatkan produk tulen.
Jika anda berada di pasaran untuk FMOC - His - AIB - OH TFA atau mana -mana sebatian yang saya nyatakan, jangan ragu untuk menjangkau rundingan pembelian. Kami sentiasa bersedia untuk memberi anda produk dan perkhidmatan terbaik.
Rujukan
- Snyder, LR, Kirkland, JJ, & Glajch, JL (2010). Pembangunan kaedah HPLC praktikal. John Wiley & Sons.
- Hermanson, GT (2013). Teknik Bioconjugate. Akhbar Akademik.